Centraal staan de verwikkelingen rondom rusthuis Klivia en zijn bewoners: inbreker Gerrit, diens Opa, de Ingenieur, pruikenmaakster Jet, en de jongens Bobby, die spinazie verbouwt, en Bertus die graag knutselt. Zuster Klivia, met zware Groningse tongval, waakt over hen. Zij krijgen het regelmatig aan de stok met hun boze buurman Boordevol. Hij heeft grote moeite met de herrie die de bewoners maken. Boordevol probeert dan ook de bewoners regelmatig te dwarsbomen en zelfs uit te zetten maar krijgt daarbij meestal zelf het deksel op zijn neus.

Vanzelfsprekend wordt het verhaal omlijst door vele, welbekende, heerlijke liedjes van Annie M.G. Schmidt en Harry Bannink. Ja Zuster, Nee Zuster is daarmee met recht een parel in de Nederlandse musical-geschiedenis, die zowel jong als oud in lengte der dagen zal blijven aanspreken.